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Funciones de dispersión intermedias de una proteína de anticuerpo monoclonal de cuerpo rígido en disolución estudiada mediante simulación dinámica de partículas disipativas

Hasta ahora década, se elevó el análisis de la curiosidad en la búsqueda de los movimientos internos de las proteínas versátiles en la resolución de la utilización de neutrones Spin Echo (NSE) como NSE puede sondear al mismo tiempo la dinámica en el tamaño y las escalas de tiempo correspondientes a los movimientos de área de proteínas. Sin embargo, la dispersión intermedia colectiva operar (ISF) medido por NSE tiene las contribuciones de traslacional, rotacional, y los movimientos internos, que son un poco difíciles de separar.

Las teorías NSE ampliamente utilizadas para interpretar los conocimientos experimentales suelen suponer que los movimientos de traslación y rotación de una partícula inflexible están desacoplados y son imparciales entre sí. Para juzgar la exactitud de esta aproximación para las proteínas de anticuerpos monoclonales (mAb) en la resolución, la simulación dinámica de partículas disipativas pc se utiliza aquí para simular un mAb de cuerpo rígido para tanto como alrededor de 200 ns.

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Se calcula el ISF completo junto con los ISFs debido únicamente a los movimientos de traslación y rotación, además de sus correspondientes coeficientes de difusión eficiente. La aproximación mencionada introduce errores considerables en los coeficientes de difusión eficiente y los ISF calculados.

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Para el coeficiente de difusión eficiente, el error lanzado por esta aproximación podría ser tan masivo como alrededor del 10% aunque el asentamiento general se tiene en cuenta asequible. Ainsi, il faut être précau au décifrer des informations avec un petit changement de signe. También se puede mencionar la precisión de los ISF calculados debido al tiempo finito de simulación en pc.

 Intermediate scattering functions of a rigid body monoclonal antibody protein in solution studied by dissipative particle dynamic simulation

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Implicación de la alfa-enolasa en las manifestaciones intestinales y extraintestinales de la enfermedad celíaca

La enfermedad celíaca es una enfermedad autoinmune intestinal de por vida, caracterizada por la intolerancia al gluten y la irritación entérica continua. Históricamente se ha presentado con manifestaciones intestinales, pero se está produciendo un cambio hacia una presentación más intestinal. Uno de los muchos órganos afectados son los programas nerviosos que ofrecen manifestaciones neuropsiquiátricas, por lo que el mecanismo y las vías no están claros.

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Se ha observado la presencia de enolasas neuronales y alfa y sus correspondientes anticuerpos en la mucosa y el suero de enfermos celíacos, además de en otras numerosas dolencias autoinmunes con manifestaciones psiconeurológicas. Los elementos compartidos entre las enolasas y la enfermedad celíaca y las interacciones entre la alfa-enolasa y la transglutaminasa tisular aconsejan nuevos mecanismos fisiopatológicos potenciales que pueden impulsar la evolución de la enfermedad celíaca.

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Los objetivos de la presente evaluación son mostrar la literatura sobre isoformas totalmente diferentes de enolasa, principalmente alfa enolasa, y sus anticuerpos particulares y para aconsejar a sus posibles mecanismos fisiopatológicos que relacionan las enolasas a las manifestaciones de la enfermedad celíaca intestinal o extraintestinal.

Inmunosensor de electroquimioluminiscencia de doble señal para la detección de enolasa específica de neuronas basado principalmente en el emisor de “doble potencial” Ru(bpy) 32+ funcionalizado con marcos metal-orgánicos basados en zinc
La enolasa neuronal específica (NSE) es un popular marcador para el seguimiento del cáncer de pulmón de células pequeñas y el neuroblastoma. Hemos ideado una técnica de detección electroquimioluminiscente (ECL) ratiométrica de doble señal para la detección delicada de NSE. En este trabajo, Ru (bpy)32+ funcionalizado a base de zinc metal-orgánico marco (Ru-MOF-5) nanoflowers (NFs) con abundantes equipos carboxilo presentar una excelente plataforma de detección biocompatible para el desarrollo de inmunosensor.

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Es importante destacar que los NFs de Ru-MOF-5 poseen una emisión ECL “dual-potencial” estable y respetuosa con el medio ambiente de cátodo (-1,5 V) y ánodo (1,5 V) dentro de la existencia del co-reactivo Ok2S2O8. Al mismo tiempo, el cátodo emisor ECL ZnO-AgNPs se emplean porque el marcador de anticuerpos secundarios, cuya participación amplificar el cátodo signo ECL como bien atenuar el ánodo ECL emisión de Ru-MOF-5 NFs.

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Mediante el seguimiento de la ECL de doble señal de -1,5 V y 1,5 V y el cálculo de sus proporciones, una técnica ratiométrica de lectura cuantificada proporcional se aplica para el inmunosensor propuesto para expresar analizar NSE. Basándose principalmente en situaciones de optimización, el inmunosensor ECL muestra una gran variación lineal de 0,0001 ng/mL a 200 ng/mL y el límite mínimo de detección es de 0,041 pg/mL.

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El inmunosensor ECL ratiométrico de “doble potencial” reduce con éxito el error del sistema o la señal de fondo mediante la autocalibración de cada emisión y mejora la fiabilidad de la detección. La técnica ratiométrica de doble señal con reproducibilidad y estabilidad aceptables ofrece perspectivas de crecimiento adicionales para la detección y evaluación de diferentes biomoléculas.

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Facilitación de la fuerza de voluntad sérica de la enolasa particular neuronal en rangos clínicamente relacionados mediante el acoplamiento de la extracción en fase sólida molecularmente impresa en línea a LC-MS/MS
La identificación y cuantificación de biomarcadores es crucial para el análisis, la terapia y el seguimiento a largo plazo de muchas dolencias humanas. En el presente trabajo, se han preparado receptores artificiales macromoleculares con afinidad y selectividad predeterminadas para el péptido característico de un biomarcador del cáncer de pulmón microcítico (CPM) de importancia pronóstica -la enolasa neuronal específica (NSE)- en un formato de microesfera polimérica porosa utilizando una técnica de síntesis dirigida por plantillas llevada a cabo en situaciones de polimerización por precipitación.

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Las microesferas de polímero se empaquetaron en columnas rápidas y se utilizaron como sorbentes molecularmente selectivos en un protocolo de extracción en fase sólida con impresión molecular (MISPE) en línea y totalmente automatizado. El protocolo MISPE en línea se optimizó con respecto a la composición de la parte de la célula de carga, la carga de la corriente y el tiempo de extracción.

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Los polímeros molecularmente impresos (MIP) confirmaron una afinidad excesiva y una selectividad útil para el objetivo peptídico -el hexapéptido ELPLYR- en comparación con los polímeros de gestión no impresos. Los MIP habían sido capaces de retener el biomarcador en la columna durante tiempos de extracción de hasta 20 minutos, y la técnica MISPE en línea permitió la restauración completa del biomarcador en la variación lineal de 10-100 ng mL-1 cuando el biomarcador estaba presente en la resolución de bicarbonato de amonio enriquecido (R2 = 0,994).

Para las extracciones de ELPLYR a partir de matrices orgánicas muy avanzadas, las recuperaciones de ELPLYR a partir de suero humano digerido tratado y no tratado con SPE de fase inversa (RP-SPE) habían sido del 100,8 ± 6,2% y 61,6 ± 1,9%, respectivamente. Las extracciones de ELPLYR a partir de suero digerido no tratado y enriquecido fueron lineales dentro de la variación de 7,5-375 ng mL-1 (R2 = 0,99).

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El límite de detección (LOD) y el límite de cuantificación (LOQ) para el biomarcador en suero digerido se habían estimado en 1,8 ng mL-1 y 6,Zero ng mL-1, respectivamente, lo que está por debajo del grado medio de referencia de NSE en personas (8,6 ng mL-1). Este trabajo sienta las bases de un nuevo instrumento de diagnóstico del CPCP que es delicado, robusto, automatizado y libre de anticuerpos, y que funciona muy bien con muestras de plasma humano avanzado.

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Inmunoensayo CEA-NSE-PSA triplexado mediante FRET de terbio a punto cuántico con temporización

El cambio de vitalidad por resonancia de Förster temporizada (TG-FRET) entre complejos de Tb y puntos cuánticos semiconductores luminiscentes (QD) proporciona propiedades fotofísicas extremadamente ventajosas para la biodetección multiplexada. Los inmunoensayos multiplexados Tb-to-QD FRET poseen un gran potencial para el diagnóstico in vitro, sin embargo, su eficiencia suele ser inadecuada para su uso en situaciones científicas.

Aquí desarrollamos un inmunoensayo TG-FRET homogéneo para la cuantificación del antígeno carcinoembrionario (CEA), la enolasa neuronal específica (NSE) y el antígeno prostático específico (PSA) a partir de un único patrón sérico mediante FRET Tb-aQD multiplexado. Se mezclaron conjugados donantes de anticuerpos Tb-IgG con conjugados aceptores de anticuerpos QD-F(ab’)2 compactos con tres QD totalmente diferentes que emiten a 605, 650 y 705 nm.

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Tras la formación avanzada del sándwich anticuerpo-antígeno-anticuerpo, los aceptores QD se habían sensibilizado a través de FRET de Tb, y los ratios de FRET de las intensidades de luminiscencia de QD y Tb TG se elevaron particularmente con concentraciones crecientes de antígeno. Aunque los límites de detección para el ensayo triplex apenas se habían incrementado en comparación con los ensayos de antígeno único, habían estado sin embargo en un foco clínicamente relacionado y podrían ser cuantificados en muestras de suero de 50 µL en un lector de placas de inmunoensayo científico B-R-A-H-M-S KRYPTOR Compact PLUS.

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La cuantificación simultánea de CEA, NSE y PSA en concentraciones totalmente diferentes a partir de un patrón de suero idéntico demostró la precisión de los inmunoensayos multiplexados Tb-to-QD FRET y el potencial de este know-how para su traslación al diagnóstico científico.

Fuentes :

  1. Gentaur
  2. NCBI
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