Se investigaron las consecuencias de la ciclofosfamida en la síntesis de 5-hidroxitriptamina (5-HT) en el tejido intestinal de ratas. Las ratas adquirieron 120 mg / kg de ciclofosfamida por vía intraperitoneal como una sola administración, y el consumo de caolín y las comidas se midió por un equipo de monitoreo computarizado. Ileal tejidos habían sido recogidos en ambos 24 o 72 h después de la administración.
La ciclofosfamida produjo un aumento importante del consumo de caolín en las fases aguda y retardada y se relacionó con una disminución del consumo de alimentos y del peso corporal. La ciclofosfamida no tuvo ninguna repercusión importante en la morfología de la mucosa intestinal, ni en la expresión de la óxido nítrico sintasa inducible y la ciclooxigenasa-2 en el intestino.
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Ciclofosfamida considerablemente elevado triptófano hidroxilasa 1 (TPH1) la expresión de ARNm, la variedad de anticuerpos anti-TPH-células positivas, y 5-HT material de contenido en el intestino. La ciclofosfamida, además, elevó considerablemente la expresión de ARNm Tac1, que codifica preprotaquiquinina-1, que es una preproteína de la sustancia P, y la variedad de células positivas a los anticuerpos antisustancia P dentro del intestino.
La ciclofosfamida elevó considerablemente los rangos de ARNm de Lgr5, Bmi1 y Atoh1, que son marcadores de la proliferación y diferenciación de las células madre. Este examen demostró que la ciclofosfamida indujo la pica en ratas, y potenció la síntesis de 5-HT relacionada con la hiperplasia de las células enterocromafines que contienen sustancia P sin infligir daño intestinal extremo.
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Caracterización de iPS87, una línea celular similar a las células madre del cáncer de próstata.
El cáncer de próstata afecta a cientos de hombres y familias de todo el mundo. Aunque la quimioterapia, la radiación, el procedimiento quirúrgico, y el remedio de privación de andrógenos se utilizan, estas terapias no remediar la mayoría de los cánceres de próstata metastásicos. Los pacientes tratados con privación de andrógenos suelen desarrollar cáncer de próstata resistente a la castración, que es incurable. Es evidente que se necesitan nuevos métodos de tratamiento.
Ya hemos demostrado que el cáncer de próstata se origina como una enfermedad de células madre. Se recogió un patrón de persona afectada por cáncer de próstata, el nº 87, obtenido de una prostatectomía quirúrgica y se congeló en forma de suspensión unicelular. Se cultivaron cultivos de células madre de cáncer, se clonaron células individuales y se demostró que eran tumorigénicas en ratones SCID.
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Sin embargo, fuera de su área de interés puro, las células madre de la mayoría de los cánceres de próstata con clase perdieron su funcionalidad de inducción de tumores y la expresión de marcadores de células madre después de aproximadamente ocho transferencias en una proporción de corte de 1:Tres. El ejercicio inductor de tumores podría restaurarse induciendo las células a la pluripotencia utilizando la estrategia de Yamanaka.
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Los cultivos de células epiteliales normales derivadas de próstata humana adquiridas de fuentes comerciales se habían inducido igualmente a la pluripotencia y éstas no adquirieron un fenotipo tumoral in vivo. Para caracterizar la línea celular iPS87, las células se tiñeron con anticuerpos contra diversos marcadores de células madre, como: ALDH7A1, LGR5, Oct4, Nanog, Sox2, Receptor de Andrógenos y Receptor X de Retinoides.
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Se descubrió que estos marcadores eran expresados por las células iPS87, y la excesiva tumorigenicidad en ratones SCID de las iPS87 fue confirmada por histopatología. Así pues, este análisis caracteriza la línea celular iPS87 como una línea celular inductora de cáncer, similar a las células madre, que puede utilizarse en la mejora de nuevas terapias para la mayoría de los cánceres de próstata.
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| L1033-.1 | ApexBio |
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| L1033-.25 | ApexBio |
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| T7 DNA | |
| 310-005 | GeneOn |
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| 310-025 | GeneOn |
p-Ezrin (Thr567) regula la vía Hippo y Yap en el hígado.
Investigaciones anteriores han demostrado que la activación de CD81, (el portal de entrada del virus de la hepatitis C) por el anticuerpo agonista conduce a la fosforilación de Ezrin a través de Syk quinasa. Ahora tenemos de antemano que su está relacionado con la inactivación de la vía Hippo y mejorar en YAP. La alternativa se produce cuando Glypican-3 (GPC3) o la proteína E2 del VHC se unen a CD81.
Los ratones transgénicos GPC3 específicos de hepatocitos presentan una disminución de p-Ezrin(Thr567) y Yap, un elevado ejercicio de Hippo y una supresión de la regeneración hepática. Se ha especulado sobre la posición de la Ezrina en estos procesos, pero no se ha confirmado. Ahora presentamos pruebas de una posición directa de Ezrin en la regulación de la vía Hippo y Yap.
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La expresión presionada de plásmidos que expresan Ezrina mutante (T567D) (imitando p-Ezrina(Thr567)) suprimió el ejercicio de Hippo y activó la señalización de Yap en hepatocitos in vivo, y potenció la activación de las vías de beta catenina y de los receptores LGR4 y LGR5. Las trazas celulares de hepatoma JM1 y JM2 han disminuido la expresión de CD81 y el ejercicio de Hippo, y han regulado al alza pEzrin(T567). NSC668394, un antagonista de p-Ezrin(Thr567), provocó una disminución importante de la proliferación de células de hepatoma. Por otra parte, la prueba actual de que p-Ezrin (T567) es gestionado por EGFR y MET.
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La fosforilación de Ezrin, mediada por la cinasa Syk asociada a CD81, interviene inmediatamente en la regulación de la vía Hippo, los rangos de Yap y el desarrollo de hepatocitos normales y neoplásicos. El descubrimiento tiene funciones mecanicistas y probablemente terapéuticas en la biología del desarrollo de los hepatocitos y la patogénesis del CHC y el VHC.
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Tumores epiteliales cutáneos caninos: Expression of the Stem Cell Markers Lgr5, Lgr6 and Sox9 in Gentle of New Most cancers Stem Cell Theories.
Cada vez hay más pruebas de que el desarrollo tumoral está impulsado por las células madre del cáncer (CSC). Con el fin de percibir la presencia y la posible contribución de las células madre (CSC) como células iniciadoras de tumores en los tumores cutáneos caninos, elegimos tres marcadores putativos de CSC (Lgr5, Lgr6 y Sox9) e investigamos su muestra de expresión, el grado de expresión de proteínas y ARNm, en 43 folículos pilosos caninos (FC) y 18 tumores epidérmicos cutáneos caninos mediante inmunohistoquímica y qRT-PCR, utilizando muestras de poros y piel normales como controles. No se detectó expresión proteica de Lgr5 en los tumores epidérmicos y de HF; sin embargo, la sobreexpresión de ARNm de Lgr5 era evidente en algunos tumores de HF.
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Sox9 se expresó en varias circunstancias tumorales, tanto a nivel de proteína como de ARNm. El anticuerpo Lgr6 examinado no era apropiado para muestras de tejido fijadas en formol e incluidas en parafina, pero el gen Lgr6 confirmó una mayor expresión en varias muestras de tumores de HF y epidérmicos en comparación con la piel y los poros normales.
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En los tricoblastomas (TB), en contraste con los carcinomas basocelulares (BCC), se observaron rangos de expresión de ARNm considerablemente mayores de los tres marcadores de SC. Los resultados actuales indican que los HF y los tumores epidérmicos caninos podrían necesitar células iniciadoras de tumores frecuentes. La expresión de ARNm de los tres marcadores SC elegidos, en particular Lgr5, podría ser útil para distinguir entre TB y CCB caninos.
Identificación y aislamiento de células LGR5+ humanas mediante una técnica basada principalmente en anticuerpos
El receptor 5 acoplado a proteína G que contiene repeticiones ricas en leucina (Lgr5) ha sido reconocido como marcador de células madre en diversos tejidos. Las células que expresan Lgr5 son, además, reguladoras de la homeostasis tisular y de la restauración de heridas, así como impulsoras del desarrollo carcinogénico. Casi todos los detalles sobre las células que expresan Lgr5 proceden de modelos de ratón genéticamente modificados.
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La investigación en humanos se ha visto restringida por la ausencia de reactivos particulares y procedimientos experimentales para la purificación de dichas células. Recientemente hemos demostrado que la purificación basada en anticuerpos se puede utilizar para adquirir células viables que expresan LGR5 a partir de tejidos humanos principales y organoides derivados de personas afectadas.
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Aquí ofrecemos estrategias detalladas para la purificación de dichas células a partir de organoides epiteliales colónicos generados a partir de tejidos derivados de pacientes, de organoides intestinales derivados de células madre pluripotentes inducidas (iPSC) y de criptas intestinales de tejidos de personas afectadas recién extraídas. Estas estrategias facilitarán la evaluación experimental de las células humanas que expresan LGR5 en la mejora, la terapéutica de heridas y la mayoría de los cánceres.
Fuentes :
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