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Un factor de adhesión sigiloso contribuye a la patogenicidad de Vibrio vulnificus: Los pili Flp intervienen en la invasión del hospedador, la supervivencia en el torrente sanguíneo y la resistencia a la activación del complemento.

Los operones tad codifican el equipo necesario para la biogénesis de los pili adhesivos Flp (proteína fimbrial de bajo peso molecular). Vibrio vulnificus, un patógeno oportunista, alberga tres loci tad distintos. Entre ellos, el locus tad1 fue el único extremadamente regulado en el microorganismo in vivo en comparación con la situación de la tradición in vitro.

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Para conocer las funciones patogénicas de los tres loci tad a lo largo de una infección, construimos mutantes de deleción simple, doble y triple del loci tad. Curiosamente, sólo las células del triple mutante Δtad123 mostraron una disminución considerable de la letalidad en ratones. Las observaciones ultraestructurales revelaron la desaparición de proyecciones filamentosas rápidas y delgadas en las células mutantes Δtad123.

MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
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PCR Mix
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Bio Basic
MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
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Dado que, paradójicamente, la pilina no era inmunogénica, se fusionó una etiqueta V5 con Flp para visualizar la proteína pilina mediante inmunogold EM y microscopía de inmunofluorescencia. Las células mutantes Δtad123 confirmaron una adhesión atenuada a las células huésped, una disminución de la formación de biopelículas, un retraso en la secreción de la exotoxina RtxA1 y, posteriormente, un deterioro de la translocación a través del epitelio intestinal en comparación con las de tipo silvestre, que posiblemente podría complementarse parcialmente con cada operón de tipo silvestre.

Rat Cholesterol ELISA ELISA
E01A11128 BlueGene
Goat Cholesterol ELISA ELISA
E01A46041 BlueGene
Mouse Cholesterol ELISA ELISA
E01A19869 BlueGene
Human Cholesterol ELISA ELISA
E01A2368 BlueGene
Sheep Cholesterol ELISA ELISA
E01A98335 BlueGene

El mutante Δtad123 era propenso a la bacteriolisis mediada por complemento, predominantemente a través de la vía de elección, lo que sugiere la función de ocultación sigilosa de los pili Tad. El agotamiento del complemento mediante el tratamiento con anticuerpos anti-C5 rescató la viabilidad de Δtad123 en el torrente sanguíneo de ratones contaminados hasta un punto similar a la presión de la especie salvaje. Tomados en conjunto, los tres loci tad cooperan para conferir la invasión rentable de V. vulnificus en el tejido más profundo y la evasión de los mecanismos de protección del huésped, en el extremo que conduce a la septicemia.

A stealth adhesion factor contributes to Vibrio vulnificus pathogenicity: Flp pili play roles in host invasion, survival in the blood stream and resistance to complement activation.

Rat Cholesterol ELISA ELISA
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El marcado mejora la detección histoquímica y bioquímica de la proteína de unión a Ran 9 in vivo y divulga su interacción con la nucleolina.

La escasez de instrumentos para detectar de forma fiable RanBP9 in vivo ha obstaculizado considerablemente el progreso en la comprensión de las capacidades orgánicas de esta proteína andamio. Informamos aquí de la tecnología de una nueva presión de ratón, RanBP9-TT, a través del cual la proteína endógena se fusiona con un doble (V5-HA) etiqueta epítopo en el C-terminal.

Protein G Beads (25ml)
Alphabioregen
Stepped Micro Tip (includes Interface Washers)
0-120-0005 Biologics
Tapered Micro Tips
0-120-0007 Biologics
Tapered Micro Tips 5 mm Diameter Tapered Titanium Micro Tip
0-120-0008 Biologics
10 mm Diameter Solid Titanium Tip
0-120-0009 Biologics

Presentamos que la doble etiqueta no interviene con las capacidades importantes de RanBP9. A diferencia de los animales RanBP9 constitutive knock-out, los ratones RanBP9-TT son viables, fértiles y no presentan ningún fenotipo aparente. La etiqueta V5-HA permite la detección inequívoca de RanBP9 tanto por IHC como por WB.

Es importante destacar que los análisis de inmunoprecipitación y espectrometría de masas revelan que la proteína etiquetada arrastra a los interactores reconocidos del tipo indómito RanBP9. Debido a la elevada energía de detección, estamos desvelando además una interacción desconocida hasta ahora con Nucleolina, una proteína propuesta como un súper objetivo para la terapia de la mayoría de los cánceres.

Protein G Beads (25ml)
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En resumen, informamos de la tecnología de una nueva línea de ratón a través del cual RanBP9 expresión y las interacciones pueden ser estudiados de forma fiable por medio de anticuerpos αtag comercialmente accesibles. El uso de esta línea ayudará a superar una serie de las limitaciones actuales dentro de la investigación de RanBP9 y sin duda revelar capacidades desconocidas de esta proteína in vivo comparables a los vinculados a Nucleolina.

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Biologics
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Degradación de CYP2A6 mediada por óxido nítrico a través de la vía de la ubiquitina-proteasoma en células de hepatoma humano.

Varias enzimas del citocromo P450 están reguladas por el óxido nítrico (NO). CYP2A6 es responsable del metabolismo de la nicotina y otros xenobióticos, pero no se ha descrito su susceptibilidad a la regulación negativa por NO. Para responder a esta pregunta, utilizamos cepas celulares de hepatoma humano HuH7 para CYP2A6 específicas con una etiqueta V5 C-terminal (CYP2A6V5).

Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
Abfrontier
Human IL-17E ELISA Kit ELISA kit
EnoGene
Human IL-17E ELISA Kit ELISA kit
EnoGene

La terapia con un donante de NO (DPTA NONOate, DPTA), reguló a la baja la proteína CYP2A6 hasta aproximadamente el 40% de los rangos de gestión en 4 horas. Un agente secuestrante de NO protegió al CYP2A6 de la regulación a la baja por DPTA en un método dependiente de la concentración, demostrando que la regulación a la baja es dependiente del NO. Los experimentos con el inhibidor de la síntesis proteica cicloheximida confirmaron que la regulación a la baja de la proteína CYP2A6 se produce postraduccionalmente.

Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
LF-EK60047
Human IL-17E ELISA Kit ELISA kit
E22-HC180.48
Human IL-17E ELISA Kit ELISA kit
E22-HC180.96

En presencia de los inhibidores del proteasoma MG132 o bortezomib, las células manipuladas con NO confirmaron una acumulación de una señal de masa molecular excesiva, mientras que los inhibidores de la autofagia cloroquina y 3-metiladenina y el inhibidor lisosomal y de la calpaína E64d no tuvieron ningún impacto. La inmunoprecipitación de CYP2A6 adoptada por Western blotting con un anticuerpo anti-ubiquitina confirmó que las especies de masa molecular excesiva incluyen la proteína CYP2A6 poliubiquitinada.

T4 DNA Ligase (T4 DNA) Enzyme
abx073011-25g Abbexa
T4 DNA Ligase (T4 DNA) Enzyme
abx073011-5g Abbexa
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-5 ApexBio
T7 DNA
310-005 GeneOn
T7 DNA
310-025 GeneOn

Esto implica que el NO condujo a la degradación de la proteína a través de la vía ubiquitina-proteasoma. La regulación a la baja por NO fue bloqueada por el inhibidor reversible de CYP2A6 pilocarpina, pero no por el inhibidor suicida metoxsaleno, lo que demuestra que la regulación a la baja requiere la entrada de NO en el sitio web energético, pero no requiere el ejercicio catalítico de la enzima.

Protein A Protein
Abbexa
Protein A Protein
Abbexa
Protein A protein
Fitzgerald

Estos hallazgos presentan nuevos conocimientos en la dirección de la regulación de CYP2A6 en una línea celular humana y puede afectar a nuestra comprensión de 2A6 metabolismo de los fármacos asociados. Esta investigación demuestra que la enzima metabolizadora de la nicotina CYP2A6 está regulada a la baja por el óxido nítrico, una molécula producida en cantidades gigantescas en el contexto de la irritación y que además se inhala del humo del cigarrillo.

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Esto ocurre a través de la ubiquitinación y la degradación proteasomal, y no requiere el ejercicio catalítico de la enzima. Este trabajo aporta a la creciente información del impacto selectivo y el mecanismo de movimiento de NO en enzimas P450, y sugiere un posible nuevo modo de interacción entre la nicotina y el NO en los fumadores de cigarrillos.

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Un novedoso sistema de marcaje de epítopos para visualizar y monitorizar antígenos en células residentes con cromocuerpos

El etiquetado de epítopos es un método flexible para comprobar proteínas completamente diferentes utilizando una metodología bien definida y establecida. Hasta ahora, la mayoría de las etiquetas epítopo comparables a las etiquetas myc, HA, V5 y FLAG son reconocidas por anticuerpos, lo que limita su uso a células, tejidos o muestras de proteínas fijadas.

Rat Cholesterol ELISA ELISA
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Aquí introducimos una técnica de etiquetado ampliamente relevante utilizando una etiqueta peptídica breve (PepTag) que es particularmente reconocida por un nanobody (PepNB). Demostramos que el PepNB puede ser simplemente funcionalizado para la inmunoprecipitación o la tinción de inmunofluorescencia directa de proteínas Pep-etiquetadas in vitro.

Para la investigación in cellulo transformamos el PepNB directamente en un Pep-cromobody marcado con fluorescencia (PepCB) que se expresa funcionalmente en células residentes. La adición del pequeño PepTag no interviene con los edificios examinados en numerosos compartimentos móviles y su detección con el PepCB permite el rastreo óptico del antígeno en tiempo real.

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