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Fragmentación y funciones de la junctofilina1 en el músculo de pacientes con fuga citosólica de calcio almacenado

Los mecanismos que hipervínculo el primer aumento en la fuga de Ca2 + SR de susceptibilidad MH y situaciones asociadas a sus fenotipos de la enfermedad no debe bien entendido. Descubrimos que la homeostasis irregular de Ca2+ en personas con MHS induce la proteólisis de junctophilin1 (JPh1), una proteína estructural necesaria del acoplamiento EC (Perni, en 2017).

Guo (en 2018) y Lahiri (en 2020) informaron de una fragmentación comparable de JPh2 en corazones acosados. Western blot del músculo de los pacientes con anticuerpos específicos de dominio confirmó un déficit de JPh1 de longitud completa y extra de un fragmento C-terminal de 44-kD (JPh44) en temas MHS. Mientras que JPh1 estaba situado en las uniones T-SR, JPh44 se descubrió en cualquier lugar dentro de la banda I, y en densidades excesivas dentro de los núcleos, una ubicación prohibida para JPh1.

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La expresión y escisión en ratones de un plásmido de JPh1 marcado en cada extremo confirmó que su fragmento N-terminal permanecía en las tríadas, y el fragmento C-terminal, ortólogo de JPh44, entraba en los núcleos, lo que significa que JPh44 es el producto de escisión C-terminal. La calpaína1 endógena apareció en las uniones T-SR, colocalizada con JPh1.

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En extractos musculares y primeros cultivos, la calpaína1 activada por Ca2+ escindió un fragmento de JPh1 de 44-kD, por el fragmento C-terminal que comienza en Ser241, el sitio de escisión de mayor probabilidad descubierto por los algoritmos de calpaína1. Finalizando la identificación de Ser241 como el inicio probable de JPh44, el plásmido de deleción etiquetado GFP-JPh1_Δ1-240, expresado en ratones, copió la colocación y migración de JPh44.

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La expresión de GFP-JPh1_Δ1-240 en mioblastos C2C12 disminuyó en más del doble la transcripción de genes PI3K-Akt que inhiben la captación muscular y el almacenamiento de glucosa, junto con GSK3β, un inhibidor de la glucógeno sintasa que se activa en los enfermos de MHS. En el asentamiento con el perfil genético, GSK3β contenido de proteína material disminuido sobre la expresión de GFP-JPh1_Δ1-240.

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9-00003 Biotium
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En resumen, las funciones reconocidas de gestión de genes de JPh44 se oponen a los resultados deletéreos de la [Ca2+] citosólica crónicamente elevada, junto con la hiperglucemia de aparición tardía y la diabetes de tipo 2 (Tammineni, en 2020).

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Identificación del factor de maduración centrosomal SSX2IP como compañero de unión a Wtip mediante biotinilación por proximidad focalizada.

La proteína que interactúa con el tumor de Wilms-1 (Wtip) es un adaptador que contiene un dominio LIM que hipervincula las uniones celulares con complejos de actomiosina y modula la contractilidad de la actomiosina y la ciliogénesis en embriones de Xenopus. El extremo C-terminal de Wtip con tres dominios LIM se asocia con la proteína de unión a actina Shroom3 y modula la constricción apical inducida por Shroom3 en células de ectodermo.

Por el contrario, la zona N-terminal se localiza en las uniones apicales dentro del ectodermo y en los cuerpos basales de las células multiciliadas de los poros y la piel. La biotinilación por proximidad focalizada (TPB) utilizando anticuerpos anti-GFP fusionados a la biotina ligasa BirA reconoció a SSX2IP como una proteína candidata que se une a GFP-WtipN. SSX2IP, también llamado Msd1 o ADIP, es un elemento de las uniones celulares, centriolar tv por satélite para pc proteína y un concentrando en cuestión para las proteínas de la membrana ciliar.

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WtipN bodily relacionados con SSX2IP y las 2 proteínas fácilmente en forma de agregados combinados en las células que sobreexpresan. Por el contrario, observamos únicamente colocalización parcial de Wtip de tamaño completo y SSX2IP, lo que sugiere que Wtip adopta una conformación “cerrada” dentro de la célula. Además, la doble depleción de Wtip y SSX2IP en embriones tempranos descubrió la útil interacción de las 2 proteínas a lo largo del cierre del tubo neural.

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Nuestros resultados recomiendan que la afiliación de SSX2IP y Wtip es crucial para la transformación de la unión celular y los procesos morfogenéticos que acompañan a la neurulación. Sugerimos que TPB en general es un método normal que es relevante para diferentes proteínas GFP-etiquetados.

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Expresión transitoria de proteínas recombinantes en vegetación utilizando vectores basados principalmente en el virus X de la patata

Los cultivos se han convertido en una prometedora biofábrica para la producción a gran escala de proteínas recombinantes debido a su bajo coste, escalabilidad y seguridad. La agroinfiltración de hojas de plantas con un vector viral vegetal portador de un gen de interés es una metodología rápida y respetuosa con el medio ambiente para la fabricación de proteínas en la vegetación.

En la actualidad, esta metodología se utiliza para producir una serie de proteínas destinadas a diversas funciones, como antígenos de vacunas, anticuerpos y nanopartículas proteicas similares a partículas víricas. Muchas proteínas farmacéuticas producidas por expresión transitoria se encuentran actualmente en fase de desarrollo médico.

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DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.25 ApexBio
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Aquí describimos el vector pEff-GFP basado principalmente en el virus X de la patata, que permite la expresión rápida y de alto nivel de proteínas recombinantes en la vegetación Nicotiana benthamiana. El vector pEff da rangos de expresión de la proteína fluorescente de color verde de hasta el 30% de la proteína soluble completa (alrededor de 1 mg por g de tejido de la hoja reciente) y se utilizó de manera eficiente para la fabricación de los inmunógenos de potencial curiosidad médica.

Protein A protein
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Abbexa
pLDH Protein Protein
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Señalización esteroide no genómica por el receptor mineralocorticoide: ¿implicación de un receptor asociado a membrana?

 

Los receptores de corticosteroides dentro de la mente de mamíferos mediar genómica, además de las acciones no genómicas. Aunque los receptores que median las acciones genómicas ya habían sido clonados 35 años en el pasado, sigue sin estar claro si las moléculas idénticas son responsables de las acciones no genómicas o que estos últimos contienen una clase separada de los receptores.

Aquí prestamos atención a un tipo de receptores de corticosteroides, es decir, el receptor de mineralocorticoides (MR). Resumimos entre las propiedades identificadas y la percepción actual dentro de la localización de la MR en las células periféricas y las neuronas, en particular en relación con la señalización no genómica.

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Investigaciones anteriores de nuestro personal y de otros laboratorios ofrecieron pruebas de que los RM que median las acciones no genómicas son idénticos a los que participan en la señalización genómica, sin embargo, también podrían ser translocados a la membrana plasmática de la célula en lugar del núcleo. Con métodos de formación de imágenes de células fijas y células vivas, hemos intentado visualizar estas presuntas MR asociadas a la membrana, utilizando anticuerpos o sobreexpresión de MR-GFP en COS7 y neuronas cultivadas de hipocampo.

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A pesar de las pruebas fisiológicas de la localización de los MR en o cerca de la membrana celular, no pudimos visualizar de forma convincente la localización en membrana de los MR endógenos o de las moléculas GFP-MR. Sin embargo, descubrimos puntas de anticuerpos marcados intracelularmente, lo que podría indicar puntos de transactivación de MR cerca de la membrana. Además, descubrimos algunas pruebas del tráfico de MR por medio de beta-arrestinas.

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En ratones knockout beta-arrestina, no observamos metaplasticidad dentro de la amígdala basolateral más, lo que indica que la internalización de MR podría desempeñar una tarea a lo largo de la activación de la corticosterona. Por otra parte, especulamos que la membrana asociada MRs podría actuar no directamente a través de la activación de la membrana diferentes edificios situados como, por ejemplo, GPER y / o receptor tirosina quinasas.

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Evaluación de ensayos serológicos para el SARS-CoV-2 como sustitutos de la neutralización viral genuina

El coronavirus 2 del síndrome respiratorio agudo extremo (SARS-CoV-2) apareció a finales de 2019 y desde entonces ha provocado una pandemia mundial que ha causado cientos de miles de casos y muertes. Los instrumentos de diagnóstico y los ensayos serológicos son esenciales para controlar el brote, en particular los ensayos diseñados para cuantificar los rangos de anticuerpos neutralizantes, considerados uno de los mejores correlatos de seguridad.

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A medida que las vacunas se vuelven más y más accesibles, será necesario determinar estrategias fiables para medir las respuestas de anticuerpos neutralizantes que se correlacionan con la neutralización del virus genuino sin embargo se llevará a cabo fuera de los laboratorios de bioseguridad etapa 3 (BSL3). Mientras que muchos ensayos de neutralización utilizando virus pseudotipados se han desarrollado, ha habido pocas investigaciones de evaluación de los ensayos completamente diferentes entre sí como sustitutos de la neutralización del virus genuino.

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Aquí caracterizamos tres ensayos inmunoenzimáticos (ELISA) y tres ensayos de neutralización del virus de la estomatitis vesicular (VSV) pseudotipados y evaluamos su concordancia con la neutralización auténtica del virus. Probablemente los ensayos más correctos para predecir la neutralización del virus genuino habían sido luciferase- y secreta fosfatasa alcalina embrionaria (SEAP)-expresando neutralizaciones de virus pseudotípicos, adoptada por la proteína fluorescente sin experiencia (GFP)-expresando neutralización de virus pseudotípicos, después de lo cual los ELISA.

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